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实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔视网膜前体分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜

。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离
。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成
，它们具有支持和营养光感受器细胞
、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层

，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜
、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜
。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜
，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多
。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系
，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部

，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口
。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强
。

方法简介：

实验室分离的兔视网膜前体采用消化法结合专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔视网膜前体经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：半贴壁半悬浮

细胞形态
：圆形

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件
：气相
：空气
，95%
；CO2，5%

兔视网膜前体体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠儿茶酚胺(CA)检测试剂盒 ，英文名
： CA ELISA Kit

Ip Nixonn Ron (Prednisolone) ELISA Kit 猪龙(Prednisolone)检测试剂盒

鱼特定基因序列(Fish)核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforLZM(HumanLysozyme)ELISAKit人

体液总胆汁酸酶循环比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitNADPH鸡腺嘌呤二核苷酸0酸

LEP重组人 Leptin 蛋白 Protein

糖原0酸化酶M(PYGM)重组蛋白 Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)

AOC1重组人 AOC1 / Diamine oxidase 蛋白 Protein

IL18R1 Protein Human 重组人 IL18R1 / CD218a 蛋白 (His & Fc 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Common magpie/Hong Kong/2256/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

糖原0酸化酶M(PYGM)重组蛋白 Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)

IL18R1 Protein Human 重组人 IL18R1 / CD218a 蛋白 (His & Fc 标签)

LEP重组人 Leptin 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Common magpie/Hong Kong/2256/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

AOC1重组人 AOC1 / Diamine oxidase 蛋白 Protein

豚鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)检测试剂盒 ，英文名： OVA sIgG ELISA Kit

Human resistin (Resistin) ELISA Kit 人抵抗素(Resistin)检测试剂盒

MonkeyE-SelectinELISAkit 猴E选择素(E-Selectin/CD62E)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBGP/Gehrelin(Mousebrain-gpeptides)ELISAKit小鼠脑肠肽

细菌牛奶石蕾琼脂平板50个

RabbitLaminin,LNELISAKit兔子层连蛋白/板层素(LN)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔视网膜前体细胞瑞-吉染色剂   100ml

Wright's-GiemsaStainingSolion

蛋白标准(5mg/mlBSA)   1ml

1-乙   25g