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① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞

，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用
。

产品名称
：兔视网膜色素上皮细胞

英文名称：Rabbit Retinal Pigment Epithelial Cells

组织来源：视网膜组织

产品规格
：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔视网膜色素上皮分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层

，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连
，由色素上皮细胞组成
，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用
。组织学上视网膜分为10层
，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜
、外颗粒层、外丛状层
、内颗粒层、内丛状层
、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜
。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成

。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上
，而视锥细胞则在中心凹处多
。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系
，负责联络作用
。第三层叫节细胞层，专管传导
。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部
，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面
，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的
，在黄斑区
，其分辨能力强
。视网膜色素上皮（RPE）位于脉络膜和光感受器细胞外节之间
，是视网膜下腔和脉络膜血管之间的离子
、水

、营养物质和代谢终产物转运通道；主要是由单层色素上皮细胞所构成，排列十分规则。视网膜色素上皮参与醇循环，吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性，并分泌多种生长因子，帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性
。细胞呈多角形
，细胞分为三部分，即顶部、体部和基底部
。视网膜色素上皮细胞无再生能力，细胞死亡后不被替换，而是邻近的细胞向侧面滑动，以死亡细胞遗留下来的空间
。视网膜色素上皮位于脉络膜和光感受器细胞外节之间
，是视网膜下腔和脉络膜血管之间的离子、水、营养物质和代谢终产物转运通道

。视网膜色素上皮参与醇循环，吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性
，并分泌多种生长因子，帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性。

公司实验室分离的兔视网膜色素上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔视网膜色素上皮经PCK免疫荧光鉴定


，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS

、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2

，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度
、年龄等

⑥ 作好记录

2
、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来
。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液
、羊水、胸水或腹水的悬液材料
，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松

，由块状变成絮状
，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

小鼠牙本质涎0蛋白   英文名称：   Mouse Dein Sialophosphoprotein   规格
：      英文缩写：   DSP

小鼠DNA抗体   英文名称：   Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody   规格：      英文缩写
：   DNA.Ab

小鼠氧化酶   英文名称：   Mouse Diamine Oxidase   规格：      英文缩写：   DAO

小鼠多巴胺受体D1   英文名称
：   Mouse Dopamine receptor D1   规格：      英文缩写
：   DRD1

小鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat calmodulin (CAM) ELISA Kit 大鼠钙调素(CAM)试剂盒

Humanverylateappearingaigen,VLAELISAKit 人迟现抗原(VLA)试剂盒 96T/48T 进口分装

C3试剂盒鲑鱼补体蛋白3规格：96T/48T

鱼类受精卵细胞冻存试剂盒(低温)50次

MouseInsulin,INSELISAKit小鼠胰岛素(INS)试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原 0.5mgPACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原)

MANF重组人 MANF / ARMET 蛋白 Protein

CD47 Protein Human 重组人 CD47 蛋白 (Fc 标签)

ACVR1 Protein Human 重组人 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 标签)

PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原 0.5mgPACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原)

CD47 Protein Human 重组人 CD47 蛋白 (Fc 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ACVR1 Protein Human 重组人 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 标签)

MANF重组人 MANF / ARMET 蛋白 Protein

兔视网膜色素上皮细胞大鼠降解产物(FDP)试剂盒

，英文名： FDP ELISA Kit

Pla zeatin riboside (ZR) ELISA Kit 植物玉米素核苷(ZR)试剂盒

Mousemacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 小鼠巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit人晚期糖基化终末产物

细胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR扩增试剂盒20次

ELISAKitC3a大鼠补体片断3a

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用

，非食用