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实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3


、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠脐动脉平滑肌分离自脐带组织；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一
，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构

，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管

，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2
，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换
。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘

，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。由于脐带是分娩过程中的废弃物，同时从脐带中分离脐静动平滑肌细胞方法相对成熟
，使得体外培养的脐动脉平滑肌细胞作为研究血管的模型细胞
。脐动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展

，细胞形态大小不一，呈梭形
、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时

，常交织成网状；密度高时
，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合

，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介

：

实验室分离的小鼠脐动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠脐动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基

：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2
，5%

小鼠脐动脉平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)检测试剂盒 
，英文名
： Col Ⅳ ELISA Kit

Mouse caspase 3 (Casp-3) ELISA Kit 小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)检测试剂盒

MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit 小鼠肾损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumahrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit人纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物

通用型羊约尼氏病/副杆菌(Mycobacteriumparatuberculosis /Johne’sdisease)试剂盒20次

ELISAKiti-PTH大鼠全段甲状旁腺素

ICAM1重组大鼠 ICAM-1 / CD54 蛋白 Protein

HisX6 聚组标签蛋白 0.5mgHisX6 聚组标签蛋白

CA5A重组人 CA5A / CA-VA 蛋白 Protein

GBP2 Protein Human 重组人 GBP-2 / GBP2 蛋白

ERBB2 Protein Mouse 重组小鼠 HER2 / ErbB2 / CD340 蛋白

HisX6 聚组标签蛋白 0.5mgHisX6 聚组标签蛋白

GBP2 Protein Human 重组人 GBP-2 / GBP2 蛋白

ICAM1重组大鼠 ICAM-1 / CD54 蛋白 Protein

ERBB2 Protein Mouse 重组小鼠 HER2 / ErbB2 / CD340 蛋白

CA5A重组人 CA5A / CA-VA 蛋白 Protein

小鼠白介素9(IL-9)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human hyaluronidase (HAase) ELISA Kit 人透明质酸酶(HAase)检测试剂盒

HumanypsinELISAKit 人(ypsin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCalcitonin,CT检测试剂盒人降钙素(CT)检测试剂盒规格：96T/48T

中性红复染试剂盒50次

Humansolubleprotein185,sp185/HER-2ELISAKit人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠脐动脉平滑肌细胞兔子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子C反应蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子酯转移蛋白(CETP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T