242net必赢

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

细胞简介
：

小鼠毛囊干分离自皮肤毛囊组织；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮
。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下组织中，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度
，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘
，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织
。毛囊干细胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一种细胞
。毛囊干细胞属于成体干细胞

，在体内处于静止状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现

，毛囊干细胞具有多向分化潜能
，它可以分化成表皮、毛囊
、皮脂腺
，参与皮肤创伤愈合的过程。毛囊干细胞和其它成体干细胞一样，具有慢周期性
、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞(hair follicle stem cells
，FSC)
、短暂增殖细胞(transit amplifying cells
，TAC)有丝分裂后分化细胞(postmitotic differentiating cells
，PDC)三个阶段。毛囊干细胞在光镜下呈立方形，细胞体积小
，核浆比率大，表面光滑，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛，细胞核存在许多卷曲
，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性
。

方法简介
：

实验室分离的小鼠毛囊干采用胶原酶 - 联合消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的小鼠毛囊干经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基

：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传3代左右

消化液

：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2
，5%

小鼠毛囊干体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基


、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1


：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

小鼠γ干扰素诱导蛋白试剂盒   小鼠γ干扰素诱导蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠γ干扰素诱导蛋白试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠γ干扰素诱导蛋白试剂盒
、小鼠γ干扰素诱导蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠γ干扰素试剂盒   小鼠γ干扰素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠γ干扰素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠γ干扰素试剂盒、小鼠γ干扰素eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠β内啡肽受体试剂盒   小鼠β内啡肽受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠β内啡肽受体试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源

：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠β内啡肽受体试剂盒

、小鼠β内啡肽受体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠β内啡肽试剂盒   小鼠β内啡肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠β内啡肽试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠β内啡肽试剂盒
、小鼠β内啡肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 大鼠0脂酶A2(PL-A2)试剂盒

humandopamine,DAELISAKIT 人多巴胺(DA)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAi-myocardialaibody,AMA试剂盒人抗心肌抗体(AMA)试剂盒规格
：96T/48T

植物染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次

HumanUlasensitivityi-iodothyronine，u-T3ELISAKit人高敏三甲状腺原(u-T3)试剂盒规格：96T/48T

EFNB1重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

H5N1-H5 H5亚型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亚型全病毒

RPS6KA2重组人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 标签) Protein

EZR Protein Human 重组人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

H5N1-H5 H5亚型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亚型全病毒

EZR Protein Human 重组人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EFNB1重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

RPS6KA2重组人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠毛囊干细胞大鼠肝素蛋白聚糖(HSPG)试剂盒 ，英文名： HSPG ELISA Kit

Mouse insulin aoaibodies (IAA) ELISA Kit 小鼠胰岛素自身抗体(IAA)试剂盒

Ratmalondialchehyche,MDAELISAKit 大鼠二(MDA)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforG-CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor)ELISAKit人粒细胞集落刺激因子

细胞谷同酸转氨酶(GPT)活性光谱法定量试剂盒20次

Raudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit大鼠的牛血清白蛋白残留检测试剂盒规格
：96T/48T