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细胞简介：

小鼠脉络膜血管内皮分离自眼球脉络膜组织；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血
。脉络膜呈暗褐色，围绕视神经乳头部有照膜
，为青绿色带金属光泽的三角形区。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜，由纤维组织
、小血管和毛细血管组成，软而薄
，棕红色，在巩膜和视网膜之间
，续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用
。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体，并有遮光作用
，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方
，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠脉络膜血管内皮采用胶原酶-混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠脉络膜血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠α肌动蛋白(α Actin)检测试剂盒 ，英文名： α Actin ELISA Kit

Mouse prolactin (PRL) ELISA Kit 小鼠催乳素(PRL)检测试剂盒

ELISA 小鼠血小板生长因子受体α(mouse PDGF sRα)  进口分装

CLIAKitforIg-j(Humanimmunoglubinjoiningchain)ELISAKitj链

通用型牛传染性鼻气管(InfectiousBovineRhinoacheitis;IBR/ BovineHerpesvirus-1;BHV-1)试剂盒20次

ELISAKitCT-1大鼠心肌营养素1

CD2重组狗 CD2 蛋白 Protein

Newcastle disease virus 鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒 1mlNewcastle disease virus 鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒)

CD83重组人 CD83 / HB15 蛋白 Protein

CTRL Protein Human 重组人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 蛋白

ICAM2 Protein Mouse 重组小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白

Newcastle disease virus 鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒 1mlNewcastle disease virus 鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒)

CTRL Protein Human 重组人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 蛋白

CD2重组狗 CD2 蛋白 Protein

ICAM2 Protein Mouse 重组小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白

CD83重组人 CD83 / HB15 蛋白 Protein

小鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human osteoclast differeiation factor (ODF) ELISA Kit 人破骨细胞分化因子(ODF)检测试剂盒

Humanmembranecofactorprotein,MCPELISAKit 人膜辅蛋白(MCP/CD46)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanacetylcholine,ACH检测试剂盒人乙酰(ACH)检测试剂盒规格
：96T/48T

正常人体肠组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠脉络膜血管内皮细胞小鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。