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① 组织块培养法

组织块培养是常用
、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层
，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞
、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离，直接培养
，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养
。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后

，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养

，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

兔羊膜成纤维分离自胎盘组织；胎盘（placenta）是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的激素
，是一个重要的内分泌器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合
，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘。羊膜是胎盘的内层
，与眼结膜组织结构相似
，含有眼表上皮细胞，包括结膜细胞和角膜上皮细胞生长所需要的物质，其光滑

，无血管
、神经及淋巴，具有一定的弹性


；在电镜下
，其分为五层
：上皮层、基底膜

、致密层、纤维母细胞层和海绵层，羊膜基底膜和羊膜羊膜基质层含有大量不同的胶元，主要为Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ
、Ⅴ
、Ⅶ型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份。羊膜成纤维细胞主要来自基底膜、致密层、纤维母细胞层。

实验室分离的兔羊膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔羊膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性

：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件
：气相
：空气
，95%；CO2
，5%

兔羊膜成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件
，直接影响细胞的体外培养
。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度
、年龄等

⑥ 作好记录

2
、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来
。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液
、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层
，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散
，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便
、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法

，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

大鼠抗利尿激素(ADH)检测试剂盒 ，英文名

： ADH ELISA Kit

Monkey heat shock protein 96 (HSP gp96) ELISA Kit热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)检测试剂盒

RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFSELISAKit大鼠卵泡抑素

细胞氧化酶活性荧光定量检测试剂盒20次

Ratplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

TCN2重组小鼠 TCN2 / Transcobalamin-II 蛋白 Protein

白蛋白(ALB)天然蛋白 Native Albumin (ALB)

B3GNT2重组人 B3GNT2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IGJ Protein Human 重组人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白

IFNA1 Protein Rat 重组大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 标签)

端粒酶关联蛋白1(TEP1)重组蛋白 Recombinant Telomerase Associated Protein 1 (TEP1)

IGJ Protein Human 重组人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白

S100B重组小鼠 S100B / S100beta 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL17RA Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 标签)

DDR2重组人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 Protein

豚鼠血清总补体(CH50)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human hepatitis E virus IgG (HEV-IgG) ELISA Kit 人戊型肝病毒IgG(HEV-IgG)检测试剂盒

Humanα-Endomorphin,α-EPELISAKit 人α-内肽(α-EP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCP检测试剂盒人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)检测试剂盒规格：96T/48T

组织D-葡萄糖氧化法定量检测试剂盒20次

humanProstaglandinE1，PG-E1ELISAKit人前列腺素E1(PGE1)检测试剂盒规格：96T/48T

兔羊膜成纤维细胞嗜酸性粒细胞阳离子蛋白   英文名称
：   eosinophil cationic protein   规格

：      英文缩写
：   ECP

表皮生长因子   英文名称：   epidermal growth factor   规格：      英文缩写：   EGF

表皮生长因子受体   英文名称：   epidermal growth factor receptor   规格：      英文缩写：   EGFR

表皮生长因子受体   英文名称：   epidermal growth factor receptor   规格：      英文缩写：   EGFR

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月
。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁
。

本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用