242net必赢

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔牙周膜干分离自牙周膜组织；牙周膜（牙周韧带、牙周间隙）是由致密结缔组织所构成
。多数纤维排列成束，纤维的一端埋于牙骨质内，另一端则埋于牙槽窝骨壁里
，使牙齿固位于牙槽窝内；牙周膜内有神经、血管、淋巴和上皮细胞等。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）来源于胚胎时期的中胚层组织，具有很强的自我复制和多向分化潜能，具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞及肌细胞等多种终末细胞定向分化的能力，运用 MSCs来修复软骨损伤具有很好的应用前景，目前已能够从骨髓、脂肪
、滑膜、骨骼、肌肉等组织以及羊水、脐带、脐带血中分离和制备间充质干细胞
。牙周膜干细胞参与了牙周组织的病变
、修复及再生过程。现在，利用牙周膜干细胞建立体外模型，已经成为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。

方法简介
：

实验室分离的兔牙周膜干采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔牙周膜干经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%
；CO2

，5%

兔牙周膜干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠前列腺素F(PGF)试剂盒   96T/48T

小鼠前列腺素E2(PGE2)试剂盒   96T/48T

小鼠前列腺素E1(PGE1)试剂盒   96T/48T

小鼠迁移率族蛋白B1（HMGB-1）试剂盒   96T/48T

小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human membrane cofactor protein (MCP/CD46) ELISA Kit 人膜辅蛋白(MCP/CD46)试剂盒

Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein,LRP-6ELISAKit 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)试剂盒 96T/48T 进口分装

Goatgrowthhormonereleasinghormone,GHRH试剂盒山羊促生长激素释放激素(GHRH)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母琥珀酸脱氢酶(SDH)活性比色法定量试剂盒20次

MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit小鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)试剂盒规格：96T/48T

SELPLG重组小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 蛋白 (Fc 标签) Protein

MARCKS相关蛋白(MARCKSL1)重组蛋白 Recombinant MARCKS Related Protein (MARCKSL1)

SCN2B重组人 SCN2B 蛋白 (Fc 标签) Protein

COL2A1 Protein Human 重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签)

食蟹猴

MARCKS相关蛋白(MARCKSL1)重组蛋白 Recombinant MARCKS Related Protein (MARCKSL1)

COL2A1 Protein Human 重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签)

SELPLG重组小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 蛋白 (Fc 标签) Protein

食蟹猴

SCN2B重组人 SCN2B 蛋白 (Fc 标签) Protein

兔牙周膜干细胞大鼠肌肉0酸果糖激酶(PFKM)试剂盒

，英文名
： PFKM ELISA Kit

Mouse tissue type plasminogen activator (t-PA) ELISA Kit 小鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒

RatDopamineD1receptor,D1RELISAKit 大鼠多巴胺D1受体(D1R)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFVIII-AgELISAKit大鼠Ⅷ相关抗原

细胞科萨基病毒A(CoxsackievirusA)定量PCR扩增试剂盒20次

RatMethemoglobin,MHBELISAKit大鼠高铁血红蛋白(MHB)试剂盒规格

：96T/48T