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实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔视网膜血管周分离自视网膜微血管组织；周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩
。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用
，其多功能性是目前研究的热点之一
，所以对血管周细胞的生物学特征

、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜
，基膜上有多种细胞连接
，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素
。它还参与毛细血管直径的双向调控；毛细血管受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介：

实验室分离的兔视网膜血管周采用胶原酶-联合消化法及不锈钢网筛过滤法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔视网膜微血管周经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体

、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性

：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2
，5%

兔视网膜微血管周体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠/离子转运ATP酶β4肽(ATP1β4)检测试剂盒 ，英文名： ATP1β4 ELISA Kit

Monkey apoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 猴载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒

RatE-SelectinELISAkit 大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGHRPELISAKit大鼠生长激素释放多肽

细胞钙调神经0酸酶(CALCINEURIN;PP2B)活性定0比色法定量检测试剂盒20次

Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAKit大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)检测试剂盒规格：96T/48T

TNFRSF11B重组食蟹猴 Osteoprotegerin / TNFRSF11B 蛋白 (Fc 标签) Protein

Mcl-1(myeloid cell leukemia 1 0.5mgMcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓样细胞白血病-1抗原

KIT重组人 c-KIT / CD117 蛋白 Protein

IL11 Protein Human 重组人 IL11 / Interleukin 11 / IL-11 蛋白

CDCP1 Protein Mouse 重组小鼠 CDCP1 蛋白

Mcl-1(myeloid cell leukemia 1 0.5mgMcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓样细胞白血病-1抗原

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CDCP1 Protein Mouse 重组小鼠 CDCP1 蛋白

KIT重组人 c-KIT / CD117 蛋白 Protein

豚鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)检测试剂盒
，英文名： PAP ELISA Kit

Two human protein disulfide isomerase (PDI) ELISA Kit 人蛋白质二硫键异构酶(PDI)检测试剂盒

MonkeyVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBMG/Beta2-MGELISAKit大鼠β2微球蛋白

细菌内生孢子(ENDOSPORE)染色试剂盒50次

RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/RLAⅠELISAKit兔主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/RLAⅠ)检测试剂盒规格：96T/48T

兔视网膜微血管周细胞生长因子   英文名称
：   Human Growth Factor   规格：      英文缩写
：   GF

生长激素释放多肽   英文名称
：   Human Growth Hormone Releasing Peptide   规格：      英文缩写
：   GHRP

生长激素   英文名称
：   Human Growth Hormone   规格
：      英文缩写
：   GH

人三0酸鸟苷环水解酶1   英文名称
：   Human Guanosine 5′-iphosphate Cyclohydrolase 1   规格
：      英文缩写
：   GCH1