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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔卵巢上皮分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状
，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管
。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构
，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央
，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管
、淋巴管和神经。卵巢上皮细胞主要功能
：①上皮细胞能分泌激素
，刺激卵细胞分化成熟
；②细胞能分泌炎症介质，参与炎症反应
。

方法简介：

实验室分离的兔卵巢上皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔卵巢上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性

：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

兔卵巢上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠促卵泡素(FSH)检测试剂盒

，英文名
： FSH ELISA Kit

Mouse 17 hydroxyprogesterone (17-OHP) ELISA Kit 小鼠17羟孕酮(17-OHP)检测试剂盒

ELISA 小鼠N端前脑素(mouse -proBNP)  进口分装

CLIAKitforLHRH(MouseLeinizingHormone-ReleasingHormone)ELISAKit小鼠黄体生成素释放激素

通用型HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定性检测试剂盒20次

ELISAKitSJA槐凝集素

CA12重组人 Carbonic Anhydrase XII / CA12 蛋白 Protein

颗粒酶K(GZMK)重组蛋白 Recombinant Granzyme K (GZMK)

MRPL44重组人 MRPL44 蛋白 Protein

IFNAR2 Protein Human 重组人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白

HA Protein H2N2 重组甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

颗粒酶K(GZMK)重组蛋白 Recombinant Granzyme K (GZMK)

IFNAR2 Protein Human 重组人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白

CA12重组人 Carbonic Anhydrase XII / CA12 蛋白 Protein

HA Protein H2N2 重组甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MRPL44重组人 MRPL44 蛋白 Protein

小鼠11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)检测试剂盒 96T/48T

Human gasin cell aibody (GCA) ELISA Kit 人胃泌素细胞抗体(GCA)检测试剂盒

PorcinePrednisoloneELISAKit 猪龙(Prednisolone)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCpGoligodeoxynucleotide,CpG-ODN检测试剂盒人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)检测试剂盒规格：96T/48T

组织COT激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProteinCarbonyl
，PCELISAKit人羰基化蛋白(PC)检测试剂盒规格：96T/48T

兔卵巢上皮细胞甜菜碱含量测定试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒   紫外分光光度法   50管/48样

二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒   紫外分光光度法   25管/24样

漆酶试剂盒   可见分光光度法   50管/24样