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实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠前列腺上皮分离自前列腺组织；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官

；前列腺是不成对的实质性器宫
，由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子，底朝上
，与膀胱相贴，尖朝下，抵泌尿生殖膈

，前面贴耻骨联合
，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口，所以，前列腺有问题时

，排尿首先受影响
。前列腺是机体非常少有的，具有内
、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺

，前列腺每天分泌前列腺液
，是构成精液主要成分
；作为内分泌腺，前列腺分泌的激素称为“前列腺素"。前列腺上皮细胞与前列腺的功能关系密切，上皮细胞的损伤是前列腺炎的主要病症
，重度的前列腺炎患者的前列腺液内可检测到脱落的上皮细胞，这是上皮细胞损伤的标志

。炎症发生时，与炎症相关的一些炎症因子可能发生变化。因此，体外培养前列腺上皮细胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基础。前列腺主要特征如下：①前列腺结构和功能活动均受雄性激素的调控
；②基底细胞主要表达高分子量细胞角蛋白（CK-5、CK-14）
，基底上皮细胞可分化成管腔上皮细胞；③前列腺上皮细胞的培养为研究前列腺的许多重要特性以及化学和激素性致癌作用提供了机会。

方法简介

：

公司实验室分离的大鼠前列腺上皮采用先消化、后胶原酶-联合消化并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠前列腺上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2

，5%

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人桩蛋白试剂盒   人桩蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人桩蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：人桩蛋白试剂盒、人桩蛋白试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人乙脱氢酶试剂盒   人乙脱氢酶试剂盒   规格型号：96T/48T   人乙脱氢酶试剂盒，规格型号：96T/48T

，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：人乙脱氢酶试剂盒、人乙脱氢酶试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人   人   规格型号：96T/48T   人，规格型号：96T/48T
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，产品别名：人、人   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人心肌锚蛋白重复域1试剂盒   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒   规格型号
：96T/48T   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：人心肌锚蛋白重复域1试剂盒、人心肌锚蛋白重复域1 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

豚鼠钩端IgG(Lebtospira)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)试剂盒

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HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMP试剂盒人环0酸鸟苷(cGMP)试剂盒规格：96T/48T

组织FGFR3激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

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G-250快速无毒型蛋白质染色试剂 100ml

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

NCR3重组人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

IL1RAP Protein Human 重组人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 标签)

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大鼠前列腺上皮细胞兔子表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)试剂盒

HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit 人内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanEsadiol,E2试剂盒人雌二醇(E2)试剂盒规格：96T/48T

组织SPHK1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

HumanorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit人孤腓肽(OFQ/N)试剂盒规格：96T/48T