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实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠气管成纤维分离自气管组织；气管（Trachea）
，呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连
；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成
，有弹性，软骨为“C"字形的软骨环
，缺口向后
，各软骨环以韧带连接起来
，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态
。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒
，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大

，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的支气管成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长

，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明

，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。气管成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

实验室分离的大鼠气管成纤维采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠气管成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%
；CO2，5%

大鼠气管成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系

，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠泛素蛋白(Ub)检测试剂盒
，英文名
： Ub ELISA Kit

Porcine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 猪免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒

鸡特定基因序列(Chicken)核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforM-AChRM3(HumanmuscarinicacetylcholinereceptorM3)ELISAKit人受体亚型M3

体液游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitLT家蚕卵黄蛋白

TEK重组人 Tie2 / CD202b 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

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CD200R1 Protein Human 重组人 CD200R1 蛋白 (His & Fc 标签)

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NTM重组人 NTM / Neurotrimin 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠受体(FOLR)检测试剂盒 96T/48T

Residues of rat and bovine serum albumin detection ELISA Kit 大鼠的牛血清白蛋白残留检测检测试剂盒

HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISAKit 人特异性巨噬细胞武装因子(SMAF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor17-KSELISAKit大鼠17-同类固醇

饮料抗坏血酸比色法定量检测试剂盒20次

MouseLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit小鼠钩端IgG(LepIgG)检测试剂盒96T96T

大鼠气管成纤维细胞小鼠组胺(mouse Histamine)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠热休克蛋白70(mouse HSP70)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠羟脯酸(mouse HYP)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠高迁移率族蛋白(mouse HMGB1)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装