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实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠淋巴血管内皮分离自淋巴血管组织；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成
。其形态结构与静脉相似，但管径较细
，管壁较薄，瓣膜较多且发达
，外形呈串珠状。淋巴管根据其位置分为浅、深二种。它们管位于皮下，常与浅静脉伴行
，收集皮肤和皮下组织的淋巴。深淋巴管与深部血管伴行
，收集肌肉和内脏的淋巴。浅
、深淋巴管之间有广泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常经过一个或多个淋巴结，从而把淋巴细胞带入淋巴液。主要功能是滤过淋巴液

，产生淋巴细胞和浆细胞
，参与机体的免疫反应。当局部感染时，细菌
、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入
，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴管内皮细胞（LEC）是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构
，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输，在疾病过程中也起着重要作用。近年研究表明
，LEC还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关。淋巴管内皮细胞主要功能
：①调节体液、蛋白和组织压力平衡；②为免疫系统的重要组成部分。淋巴管内皮细胞与主要病生理变化：①囊肿型淋巴管瘤
；②淋巴管炎；③淋巴结核。

方法简介：

实验室分离的大鼠淋巴血管内皮采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠淋巴血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性

：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

大鼠淋巴血管内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(CaMKK)检测试剂盒 ，英文名

： CaMKK ELISA Kit

Porcine low molecular weight heparin (LMWH) ELISA Kit 猪低分子肝素(LMWH)检测试剂盒

转基因植物Bar基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMCP-1/CCL2/MCAF(Humanmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor)ELISAkit人单核细胞趋化蛋白1

体液血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)总活性荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitWGA麦胚凝集素/凝集蛋白

BTLA重组小鼠 BTLA 蛋白 (Fc 标签) Protein

防御素β131(DEFβ131)重组蛋白 Recombinant Defensin Beta 131 (DEFb131)

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 标签) Protein

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

CD3D Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白

防御素β131(DEFβ131)重组蛋白 Recombinant Defensin Beta 131 (DEFb131)

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

BTLA重组小鼠 BTLA 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD3D Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠乙型肝表面抗体(HBsAb)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble cluster of differeiation 28 (sCD28) ELISA Kit 人可溶性白细胞分化抗原28(sCD28)检测试剂盒

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饮料L-苹果酸比色法定量检测试剂盒20次

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软骨糖蛋白 39(YKL-40)   作用
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小鼠血管紧张素转化酶(mouse ACE)   作用：   ELISA   规格：      进口分装