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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2


、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4


、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

脑血管周细胞分布于脑组织的微血管系统中，调节血管形成、稳定和功能的关键因素。周细胞典型的特征是有一个突出的核
，核周围胞浆较少
，有许多平行于微血管长轴的突起，这些突起逐渐变细并包绕微血管腔

，起到对管腔的支持作用。同时，一个周细胞可以通过伸展的突起与微循环中的多个接触。此外，周细胞和内皮细胞间的相互作用在血管新生中具有极为重要的作用
。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常脑组织。

2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 DELF 原代 周 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

公司正在出售的产品
：

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3（TRAIL-R3）elisa检测试剂盒

ISLR2蛋白抗体

ISLR2

碳酸酐酶6抗体

CA6

透射电镜（TEM）镍质载网

人GTP酶NRas(NRAS)elisa分析检测试剂盒

大鼠Toll样受体4（TLR-4）elisa检测试剂盒

小鼠溶血酰基转移酶3(LPCAT3)elisa检测试剂盒

转移相关蛋白2抗体

MTA2

FAM101B蛋白抗体

FAM101B

微管蛋白β tubulin抗体 Tubulin β  Anti-tubulin Beta

环指蛋白139抗体  Anti-RNF139

膜相关蛋白Numb抗体  Anti-NUMB

鞘氨醇激酶1抗体  Anti-SPHK1

人水痘带状疱疹病毒gE蛋白抗体

VZV gE

细胞迁移诱导蛋白19抗体

NBR1

细胞S期激酶相关蛋白2抗体  Anti-SKP2/skp2 p45

核因子κB抑制蛋白α抗体  Anti-NFKBIA/IKB alpha

磷酸化减数分裂重组蛋白家族REC8抗体  Anti-phospho-REC8(Ser251)

味觉受体蛋白家族2亚基16抗体  Anti-TAS2R16

大鼠分泌型球蛋白A(sIgA)elisa分析检测试剂盒

KIAA1841蛋白抗体

KIAA1841

染色质修饰蛋白1B抗体

兔脑血管周细胞CHMP1B

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞


。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。