242net必赢

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二


、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

肠神经系统胶质细胞类似神经系统的星形胶质细胞，肠神经系统以网络结构广泛分布于浆膜下层
、纵肌层、肌间层、环肌层
、深肌层、粘膜肌层和粘膜层。肠神经胶质主要位于肠肌间丛和粘膜下丛神经节
，与神经节交织成团并与节间神经束相互连接
。

肠神经胶质不但对神经系统起支持作用，还在调控神经元生长、发育
、神经回路功能和细胞凋亡过程中起重要作用。

细胞特性
：

1） 组织来源于实验动物的正常肠组织
。

2) 细胞鉴定：GFAP荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和
。

5) 细胞生长方式：不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 delf原代星形胶质细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF10)检测试剂盒 ，英文名： FGF10 ELISA Kit

Mouse C reactive protein (CRP) ELISA Kit 小鼠C反应蛋白(CRP)检测试剂盒

ELISA 小鼠肌酸激酶(mouse CK)  进口分装

CLIAKitforLensculinarisagglinin,LCAELISAKit扁豆凝集素

通用型HSV2(HERPESSIMPLX2)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

ELISAKitapo-A1猴载脂蛋白A1

GP140重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (Fc 标签) Protein

Tie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪激酶1抗原 0.5mgTie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪激酶1抗原

IL18RAP重组人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 标签) Protein

GGT5 Protein Human 重组人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 标签)

LDLR Protein Human 重组人 LDLR / LDL Receptor 蛋白

Tie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪激酶1抗原 0.5mgTie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪激酶1抗原

GGT5 Protein Human 重组人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 标签)

GP140重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (Fc 标签) Protein

LDLR Protein Human 重组人 LDLR / LDL Receptor 蛋白

IL18RAP重组人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠白介素28(IL-28)检测试剂盒 96T/48T

Rat chorionic gonadoophin (CG) ELISA Kit 大鼠绒毛膜(CG)检测试剂盒

Humansolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancarbonicanhydrase2,CA-2检测试剂盒人酶2(CA-2)检测试剂盒规格：96T/48T

重组腺病毒包装试剂盒1套

HumansolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠肠神经胶质细胞兔子可溶性P选择素(sP-selectin)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子可溶性E选择素(sE-selectin)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装