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① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中
，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养
，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称
：猪骨髓间充质干细胞

英文名称：Porcine Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

组织来源
：骨髓

产品规格
：5×105cells/T25细胞培养瓶

猪骨髓间充质（BMSC）分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内
。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓
。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体
。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨
、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中
，是一种海绵状的组织
，能产生血细胞的骨髓略呈红色
，称为红骨髓。出生时
，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多
，相当部分红骨髓被黄骨髓取代
，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的

、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞

，可以向骨、软骨、肌组织
、皮肤
、脂肪
、神经等多种组织分化
，因此可以作为组织工程中的种子细胞
。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%
，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中
，受贴壁时间
、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。

公司实验室分离的猪骨髓间充质干采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的猪骨髓间充质干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2

、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开
，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞
。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大
，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)
，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动
，使团块膨松
，由块状变成絮状，此时再采用机械法
，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散

，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后
，细胞容易贴壁生长。

大鼠胃动蛋白2(GKN2)检测试剂盒 ，英文名： GKN2 ELISA Kit

Mouse aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白3(AQP-3)检测试剂盒

MouseomeinELISAKit 小鼠网膜素(omein)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhs-CRP(MousehighsensitivityC-ReactiveProtein)ELISAKit小鼠超敏C反应蛋白

细胞NADP依赖性甘油-3-0酸脱氢酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitβ-TG大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白

IL2RB重组小鼠 CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 蛋白 Protein

基质金属蛋白酶7(MMP7)重组蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)

CALCB重组人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

GRK5 Protein Human 重组人 GRK5 / GPRK5 蛋白

FUT8 Protein Hamster 重组仓鼠 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签)

基质金属蛋白酶7(MMP7)重组蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)

GRK5 Protein Human 重组人 GRK5 / GPRK5 蛋白

IL2RB重组小鼠 CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 蛋白 Protein

FUT8 Protein Hamster 重组仓鼠 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签)

CALCB重组人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠β酚(β-naphthol)LISA 试剂盒 96T/48T

Human vitamin B12 (VB12) ELISA Kit 人B12(VB12)检测试剂盒

Humanai-cailage-aibodyELISAKit 人抗软骨抗体(ai-cailage-Ab)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCenomereProtein,CENP-B检测试剂盒人着丝粒蛋白B(CENP-B)检测试剂盒规格
：96T/48T

转基因玉米MON809品系试剂盒20次

HumanSerumamyloidA
，SAAELISAKit人血清淀粉样蛋白A(SAA)检测试剂盒规格：96T/48T

猪骨髓间充质干细胞兔中性粒细胞弹性蛋白酶(rabbit NE)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装

兔神经生长因子(rabbit NGF)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔神经营养素3(rabbit -3)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装

兔骨钙素(rabbit Osteocalcin)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月
。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗
，非药用
，非食用