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实验报告

：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

小鼠外周血白分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液
，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，242net必赢把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。白细胞（Leukocyte）
，旧称白血球

，血液中的一类细胞。根据白细胞的细胞质内有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞
。前者常简称为粒细胞
，根据其特殊颗粒的染色特性，又分为中性粒细胞
、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，白细胞也通常被称为免疫细胞
。在显微镜下可以看到，血细胞中体积比较大、数量比较少
，具有细胞核；其主要作用是吞噬细菌
、防御疾病。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠外周血白采用取外周血
、通过密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠外周血白经过检测，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖
；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

血管内皮生长因子 D(VEGF-D)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

血管内皮生长因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

血管内皮生长因子受体 1(VEGF-R1)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

血管内皮生长因子受体 2(VEGF-R2)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠幽门螺杆菌抗体IgG(HP-IgG)试剂盒 96T/48T

Human granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 人颗粒酶B(Gzms-B)试剂盒

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9ELISAKit 人糖链抗原19-9(CA19-9)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor6-K-PG(Mouse6-keto-prostaglandin)ELISAKit小鼠6同前列腺素

引物设计合成和酶切位点分析1个基因

Mousemelanocyteaibody,MCAbELISAKit小鼠黑色素细胞抗体(MCAb)试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CTHRC1重组人 CTHRC1 蛋白 Protein

CCL3 Protein Human 重组人 CCL3 / Mip1a 蛋白

HSPB1 Protein Human 重组人 HSP27 / HSPB1 蛋白

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CCL3 Protein Human 重组人 CCL3 / Mip1a 蛋白

HA重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

HSPB1 Protein Human 重组人 HSP27 / HSPB1 蛋白

CTHRC1重组人 CTHRC1 蛋白 Protein

小鼠外周血白细胞大鼠凋亡相关因子(FAS)试剂盒 

，英文名： FAS ELISA Kit

Porcine myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit 猪髓过氧化物酶(MPO)试剂盒

玉米特定基因序列(IVR)核酸试剂盒 48T

CLIAKitforLTA(Humanlipoteichoicacids)ELISAKit人脂0壁酸

铁成分比色法定量试剂盒20次

ELISAKitIgA鸡免疫球蛋白A