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细胞简介：

小鼠食管成纤维分离自食管组织
；食管是咽和胃之间的消化管，食管在系统发生上起初很短
，随着颈部的伸长和心肺的下降
，而逐渐增长
。食管可分为颈段
、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连
。在发育过程中，食管的上皮细胞增殖，由单层变为复层，食管使管腔变狭窄
，甚至一度闭锁
，以后管腔又重新出现
。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中
，黏膜层，包括上皮、固有层和黏膜肌层
。食管的外膜，由疏松结缔组织构成
，富有血管、淋巴管及神经。主要包含食管成纤维细胞，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁

，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团

；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦
、胞体较大
，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合

，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的小鼠食管成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠食管成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基

：基础培养基
，含FBS

、bFGF
、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右

消化液
：0.25%

培养条件
：气相
：空气，95%；CO2，5%

小鼠食管成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次


，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）


，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠转化生长因子-β2(mouse TGF-β2)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠可溶性粒细胞靶受体(mouse sEM-1)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠端粒酶(mouse Telomerase)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠Toll样受体-2(mouse TLR-2)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠氧化型高密度脂蛋白(ox-HDL)试剂盒 96T/48T

Human soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1 (sPECAM-1/sCD31) ELISA Kit 人可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)试剂盒

HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISAKit 人毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor12-HETE(Human20-hydroxyeicosateaenoicacid)ELISAKit人12羟二十烷四烯酸

饮料柠檬酸比色法定量试剂盒20次

MouseLactoferrin,LTF/LFELISAKit小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)试剂盒规格：96T/48T

NBL1重组小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 Protein

半乳糖凝集素2(GAL2)重组蛋白 Recombinant Galectin 2 (GAL2)

NRAS重组人 NRAS 蛋白 Protein

CD22 Protein Human 重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白

CD274 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

半乳糖凝集素2(GAL2)重组蛋白 Recombinant Galectin 2 (GAL2)

CD22 Protein Human 重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白

NBL1重组小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 Protein

CD274 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

NRAS重组人 NRAS 蛋白 Protein

小鼠食管成纤维细胞大鼠多肽YY/酪酪肽(PYY)试剂盒 ，英文名： PYY ELISA Kit

Porcine hydrocoisone (HYD) ELISA Kit 猪轻化1(HYD)试剂盒

动物源性成分(18S)核酸试剂盒 48T

CLIAKitforLy6a(Humanlymphocyteaigen6complexlocusA)ELISAKit人淋巴细胞抗原6复合物基因座A

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量试剂盒50次

ELISAKitNO鸡血清

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞


，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿


。不是1个T25瓶传2个10cm皿。