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实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠肾上腺皮质分离自肾上腺组织；肾上腺是人体相当重要的内分泌器官，由于位于两侧肾脏的上方
，故名肾上腺。肾上腺左右各一，位于肾的上方，共同为肾筋膜和脂肪组织所包裹。左肾上腺呈半月形，右肾上腺为三角形
。从侧面观察，腺体分肾上腺皮质和肾上腺髓质两部分
，周围部分是皮质，内部是髓质。肾上腺内部是髓质部分

，分泌肾上腺素和。这些激素在应激状态释放增多，能够帮助升高血压
，加快心率
，升高血糖，动员全身的储备物质，为机体与外界环境的抗争作好充分准备。肾上腺外部是皮质部分
，分泌醛固酮、和少量的雌雄激素

。醛固酮能够促进小便中尿钾的排出和尿钠的重吸收，正常数量的醛固酮，对维持人体正常血压有重要作用
。但是如果过多分泌，会导致高血压和低血钾
。是人体必需的激素之一。当人体处于应激状态时，比如感冒，发烧
，遇到突发事件的时候
，肾上腺皮质分泌大量的
，这些能够动员机体的存储能源，为应对内部或者外部重要事件提供充分的物质准备
。当缺乏时，机体在遇到重大事件的时候，往往缺乏足够应对能力
，容易被病毒或外界压力所击倒
。肾上腺产生的雄激素，对男性来讲
，并非，但是对女性而言，是雄激素的一个重要来源
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠肾上腺皮质采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肾上腺皮质经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠抑制素B(INH-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促上皮质激素释放激素(CRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血清总补体(CH50)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受体(D2R)试剂盒

Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 人β甘露糖苷酶(βManase)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(CTX-I)ELISAKit大鼠Ⅰ型胶原C端肽

荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液(荧光稳定
、保存)5/20毫升

MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit小鼠白介素18(IL-18)试剂盒规格：96T/48T

CD38重组大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生长因子受体3(抗原)

RSPO3重组人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签) Protein

CD38 Protein Human 重组人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 标签)

CES2 Protein Mouse 重组小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生长因子受体3(抗原)

CD38 Protein Human 重组人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 标签)

CD38重组大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

CES2 Protein Mouse 重组小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

RSPO3重组人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签) Protein

小鼠肾上腺皮质细胞大鼠法尼醇X受体(FXR)试剂盒 ，英文名
： FXR ELISA Kit

Porcine endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 猪内皮素1(ET-1)试剂盒

鸭特定基因序列(Duck)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforM-AChRELISAKit大鼠受体

体液游离氨基酸含量荧光定量试剂盒20次

ELISAKitTGF-β1鸡转化生长因子β1