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实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠卵泡膜分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官
，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同
，仅左侧发育（右侧已退化）
，呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色
，卵巢表面密布血管
。卵巢的大小与年龄和产卵期有关
。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织
，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质
。皮质位于卵巢的周围部分

，主要由卵泡和结缔组织构成
；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经
。哺乳动物的卵巢内卵泡的发育需要相关激素的调节才能完成，垂体（卵泡刺激素和黄体生成素）使原始卵泡开始发育，其过程中还产生大量的雌激素。雌激素是卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞在垂体的作用下协同合成的
，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，并转变为雌激素。因此，卵泡膜细胞在生殖内分泌调节中占有关键的位置
，了解其在病理及生理中的作用
，对于与性激素有关的妇产科疾病（如多囊卵巢综合症、卵巢癌等）的研究有着重要意义。在哺乳动物卵泡生长发育的过程中
，卵母细胞由不断增加的颗粒细胞层包裹。卵巢组织中的膜细胞作为卵泡的外层细胞可以维持卵泡结构的完整性
，参与构成卵母细胞和颗粒细胞发育的微环境且为类固醇激素的生成提供底物
。在哺乳动物中调节膜细胞类固醇激素生成的机制已见相关报道，但是有关卵泡膜细胞的聚集、生长和分化的研究尚不深入。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠卵泡膜采用先机械分离后胶原酶消化结合Percoll密度梯度离心法
、并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠卵泡膜经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)检测试剂盒

，英文名： ANGPTL4 ELISA Kit

Mouse prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 小鼠前列腺素E1(PGE1)检测试剂盒

Mouseangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 小鼠血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCalreticulin,CELISAKit人钙网蛋白

细胞CSK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitTE大鼠端粒酶

CD36重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

Bursin 囊素三肽/三肽囊素/鸡法氏囊三肽 100mgBursin 囊素三肽/三肽囊素/鸡法氏囊三肽

CCL15重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签) Protein

CTNNB1 Protein Human 重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签)

NTRK1 Protein Rat 重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签)

Bursin 囊素三肽/三肽囊素/鸡法氏囊三肽 100mgBursin 囊素三肽/三肽囊素/鸡法氏囊三肽

CTNNB1 Protein Human 重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签)

CD36重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

NTRK1 Protein Rat 重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签)

CCL15重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签) Protein

小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)检测试剂盒

HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit 人复制蛋白A(RPA-70)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human5-Nucleotidase,5-检测试剂盒人5核苷酸酶(5-)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌天青曙红(Azure-eosinate)染色试剂盒50次

Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISAKit小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠卵泡膜细胞小鼠抗利尿激素检测试剂盒   小鼠抗利尿激素试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠抗利尿激素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠抗利尿激素试剂盒、小鼠抗利尿激素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体检测试剂盒   小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒、小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠抗肌内膜抗体IgA检测试剂盒   小鼠抗肌内膜抗体IgA试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗肌内膜抗体IgA试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗肌内膜抗体IgA试剂盒、小鼠抗肌内膜抗体IgAeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠抗红细胞抗体检测试剂盒   小鼠抗红细胞抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗红细胞抗体试剂盒

，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗红细胞抗体试剂盒
、小鼠抗红细胞抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。