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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠呼吸道上皮分离自呼吸道；呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道，有肺脊椎动物的呼吸道分上、下两部：鼻、咽和喉合称上呼吸道。气管及其以后一分再分的管道

，合称为下呼吸道，或称为气管树
。气管树是随着动物的进化逐渐复杂化的
。整个呼吸道内表面都分布有分泌液和纤毛（鼻孔、咽后壁和声带黏膜除外），它能温暖（或冷却）
、湿润和净化吸入的空气，对于呼吸器官和机体有着保护作用
。呼吸道以骨或软骨做支架，其内表面覆盖着黏膜，黏膜内分布着丰富的毛细血管。呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面
，主要由柱状
，杯形，梭形和锥形等不同形状细胞组成。看上去像复层上皮，但实际上所有细胞底部均附于基膜上
，属单层上皮，故称假复层柱状上皮，上皮表面有纤毛
，杯状细胞可分泌粘液，包裹着大量细菌
，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠呼吸道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠呼吸道上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠I型胶原(COL1)检测试剂盒
，英文名： COL1 ELISA Kit

Mouse secretory immunoglobulin A (sIgA) ELISA Kit 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)检测试剂盒

ELISA 小鼠血小板生成素(mouse TPO)  进口分装

CLIAKitforICAM-3/CD50ELISAKit大鼠细胞间粘附分子3

通用型嗜肺军团菌(Legionellapneumophilia)试剂盒20次

ELISAKitPLGF大鼠胎盘生长因子

SELP重组小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白 Protein

红细胞补体受体1(CR1)重组蛋白 Recombinant Complement Receptor 1, Erythrocyte (CR1)

TSPAN7重组人 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 Protein

CSNK2A2 Protein Human 重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 标签)

IL17A Protein Marmoset 重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白

红细胞补体受体1(CR1)重组蛋白 Recombinant Complement Receptor 1, Erythrocyte (CR1)

CSNK2A2 Protein Human 重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 标签)

SELP重组小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白 Protein

IL17A Protein Marmoset 重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白

TSPAN7重组人 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 Protein

小鼠型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat thyroid peroxidase (TPO) ELISA Kit 大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)检测试剂盒

Humanasialoglycoproteieceptor,ASGPRELISAKit 人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human28SribosomeRNPaibody,28SrRNP检测试剂盒人28S抗核糖体抗体(28SrRNP)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次

Mouseai-zonapellucidaaibody,aZPELISAKit小鼠抗透明带抗体(aZP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠呼吸道上皮细胞小鼠可溶性 P- 选择素 (mouse sP-Selectin/ sCD62P)   作用
：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠转化生长因子 -β1 (mouse TGF-β1)   作用
：   ELISA   规格
：   96T   奥地利 Bender

小鼠基质金属蛋白酶抑制因子 -1(mouse TIMP-1)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠坏死因子 - a (mouse TNF- a )   作用：   ELISA   规格：   96T   法国 Diaclone