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实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介

：

‍小鼠颌骨成纤维分离自颌骨组织；颌骨，是指颌部的骨头
，分为上颌骨和下颌骨。构成口腔上下部的骨头和肌肉组织，上部叫上颌

，下部叫下颌

。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大
，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显

。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的成纤维细胞呈圆形

、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起

；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长

，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

方法简介
：

实验室分离的小鼠颌骨成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的小鼠颌骨成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基
：含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

小鼠颌骨成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

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：   Substance P

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：      英文缩写：   SP-A

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小鼠S100钙结合蛋白A7   英文名称：   Mouse S100 Calcium Binding Protein A7   规格
：      英文缩写
：   S100A7

小鼠颌骨成纤维分离自颌骨组织；颌骨，是指颌部的骨头，分为上颌骨和下颌骨
。构成口腔上下部的骨头和肌肉组织，上部叫上颌
，下部叫下颌
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛

，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦

、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状

；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布

。