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实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

细胞简介
：

小鼠肺动脉内皮分离自肺动脉组织
；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行。细胞呈单层多角形铺路石状分布
；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用
。肺动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布
，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介：

实验室分离的小鼠肺动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠肺动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV

、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

小鼠肺动脉内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1


：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品

：

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

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Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)试剂盒规格
：96T/48T

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髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)重组蛋白 Recombinant Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)

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HA Protein H4N6 重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

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小鼠肺动脉内皮细胞大鼠还原酶(GR)试剂盒

，英文名： GR ELISA Kit

Porcine Bcl-2 associated X protein (BAX) ELISA Kit 猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒

多瘤病毒(BK) 核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIP-3Beta/ELC/CCL19(HumanMacrophageInflammatoryProtein-3Beta)ELISAkit人巨噬细胞性蛋白3β

体液结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性荧光定量试剂盒20次

ELISAKitIL-4犬白介素4