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细胞简介：

兔阴道壁成纤维分离自阴道组织；阴道位于膀胱
、尿道和直肠之间
，是一个富有弹性的管状器官。它在人类生殖过程中具有多种生理功能，是连接子宫与外阴的通道，是排出月经血
、娩出婴儿的必经之路，也是一个重要的性交器官。阴道壁按组织学由外到内分三层，即黏膜层
、肌层和外膜。1）黏膜层由上皮和固有膜组成
。上皮较厚，为复层鳞状上皮，从基底层到表层由基底层、旁基底层、中间层和表层组成。没有角化层。阴道粘膜的基底层呈细波纹状起伏
。2）肌层由平滑肌组织构成，肌束排列不规则，纵行和环形互相交错


。肌束间有较多的结缔组织和弹性纤维

。阴道外口有环形的横纹肌称括约肌。3）外膜层为纤维膜，由结缔组织构成
，内含丰富的弹性纤维、静脉丛、淋巴管和神经
。大鼠阴道壁成纤维细胞主要分离自外膜层
，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介
：

实验室分离的兔阴道壁成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的tu阴道壁成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

兔阴道壁成纤维体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告

：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬


，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗


，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

兔子表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)检测试剂盒

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：96T/48T

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IL1RAP Protein Human 重组人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 标签)

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IL23 Protein Human 重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

G-250快速无毒型蛋白质染色试剂 100ml

IL1RAP Protein Human 重组人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 标签)

NCR3重组人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

豚鼠钩端IgG(Lebtospira)ELISA 试剂盒 96T/48T

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humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit 人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMP检测试剂盒人环0酸鸟苷(cGMP)检测试剂盒规格：96T/48T

组织FGFR3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanprimaryhepaticcarcinoma,PHCELISAKit人肝癌抗原(PHC)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔阴道壁成纤维细胞人桩蛋白检测试剂盒   人桩蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人桩蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人桩蛋白试剂盒、人桩蛋白检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人乙脱氢酶检测试剂盒   人乙脱氢酶试剂盒   规格型号
：96T/48T   人乙脱氢酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：人乙脱氢酶试剂盒

、人乙脱氢酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

人血红蛋白检测试剂盒   人血红蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   人血红蛋白试剂盒
，规格型号
：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名：人血红蛋白试剂盒
、人血红蛋白检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

人心肌锚蛋白重复域1检测试剂盒   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒   规格型号：96T/48T   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源

：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人心肌锚蛋白重复域1试剂盒
、人心肌锚蛋白重复域1 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。