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细胞简介：

兔牙周膜成纤维分离自牙周膜组织
；牙周膜（牙周韧带

、牙周间隙）是由致密结缔组织所构成
。多数纤维排列成束，纤维的一端埋于牙骨质内，另一端则埋于牙槽窝骨壁里，使牙齿固位于牙槽窝内
；牙周膜内有神经、血管、淋巴和上皮细胞等。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化

；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的牙周膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大

，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。牙周膜成纤维细胞（PLFs）作为牙周膜的主体细胞，是牙周膜主要的间质细胞，它不仅具有合成胶原、基质
、弹力纤维和糖蛋白的功能
，还有吸收胶原吞噬异物的能力，还参与了牙周组织的病变、修复及再生过程。现在

，利用牙周膜细胞建立体外模型
，已经成为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。

方法简介：

实验室分离的兔牙周膜成纤维采用胶原酶-联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔牙周膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性

：可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

兔牙周膜成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养


；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

小鼠前列腺素E2   英文名称
：   prostaglandin E2   规格
：      英文缩写：   PGE2

小鼠分泌型0脂酶A2   英文名称：   secretary phospholipase A2   规格

：      英文缩写
：   sPLA2

小鼠多效生长因子   英文名称
：   Pleioophin   规格
：      英文缩写：   PTN

小鼠抑癌基因P53蛋白   英文名称：   aioncogene p53 protein   规格：      英文缩写：   P53

小鼠神经降压肽()试剂盒 96T/48T

Human membrane attack complex (MAC) ELISA Kit 人膜攻击复合物(MAC)试剂盒

HumanHighdensitylipoproteincholesterol,HDL-CELISAKit 人高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒 96T/48T 进口分装

GoatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRP试剂盒山羊生长激素释放多肽(GHRP)试剂盒规格

：96T/48T

真菌/酵母碱性焦0酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法定量试剂盒20次

MousecoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit小鼠Ⅹ(FⅩ)试剂盒规格：96T/48T

MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 标签) Protein

IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原

WFDC2重组人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein

COL4A3BP Protein Human 重组人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 标签)

SPN Protein Mouse 重组小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 标签)

IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原

COL4A3BP Protein Human 重组人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 标签)

MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 标签) Protein

SPN Protein Mouse 重组小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 标签)

WFDC2重组人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein

兔牙周膜成纤维细胞大鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)试剂盒

，英文名： CKMB ELISA Kit

Mouse tissue polypeptide aigen (TPA) ELISA Kit 小鼠组织多肽抗原(TPA)试剂盒

RatCalretinin,CRELISAKit 大鼠钙结合蛋白(CR)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFVIIIAg(MouseFactorVIII-relatedAigen)ELISAKit小鼠第八因子相关抗原

细胞抗坏血酸比色法定量试剂盒20次

Ratmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAKit大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。