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① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中
，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞
，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养

，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称
：兔食管平滑肌细胞

英文名称
：Rabbit Esophageal Smooth Muscle Cells

组织来源
：食管

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔食管平滑肌分离自食管组织
；食管可分为颈段、胸段和腹段，脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左
、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层

、肌层和外膜。其中
，肌层上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成
。其中，肌纤维的排列方式分为内环形和外纵形两层。食管的蠕动是由食管平滑肌收缩严格控制，食管还有括约肌，位于环状软骨水平的，称为食管上括约肌；位于食管下端，一部分在膈上
，穿过膈孔，另一部分在膈下的高压带
，称为食管下括约肌。食管平滑肌细胞原代分离培养3天后
，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一
，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中
；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形
，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时
，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

实验室分离的兔食管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔食管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

兔食管平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密
，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开

，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密
，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便
、快速,但对组织机械损伤大
，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状
，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后，细胞容易贴壁生长
。

小鼠核因子kb（NF-kb）试剂盒   96T/48T

小鼠汉坦病毒（HV）试剂盒   96T/48T

小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)试剂盒   96T/48T

小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)试剂盒   96T/48T

小鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human chemokine (FK) ELISA Kit 人趋化因子(FK)试剂盒

HumanSurfaceMembraneImmunoglobulin,SmIgELISAKit 人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanalveolibasememembranezoneaibody,ABM-Ab试剂盒人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)试剂盒规格：96T/48T

植物超氧化物阴离子荧光法定量试剂盒20次

MonkeyIerleukin4,IL-4ELISAKit猴白介素4(IL-4)试剂盒规格：96T/48T

CD86重组食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白 (Fc 标签) Protein

LH(Luteinizing Hormone 0.5mgLH(Luteinizing Hormone) 人促黄体生成素(多肽)

PHPT1重组人 PHPT1 / PHP14 蛋白 Protein

DNAJC30 Protein Human 重组人 DNAJC30 蛋白

NLGN1 Protein Mouse 重组小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白

LH(Luteinizing Hormone 0.5mgLH(Luteinizing Hormone) 人促黄体生成素(多肽)

DNAJC30 Protein Human 重组人 DNAJC30 蛋白

CD86重组食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白 (Fc 标签) Protein

NLGN1 Protein Mouse 重组小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白

PHPT1重组人 PHPT1 / PHP14 蛋白 Protein

兔食管平滑肌细胞大鼠接触蛋白3(CN3)试剂盒 ，英文名： CN3 ELISA Kit

Mouse neuophil gelatinase associated lipocalin (NGAL) ELISA Kit 小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)试剂盒

RatThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit 大鼠纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit鱼骨钙素/骨谷蛋白

细胞基质金属蛋白酶(MMP1/8/13)原位明胶酶谱法(insituzymography)荧光染色试剂盒20次

RatOsteoprotegerin,OPGELISAKit大鼠骨保护素(OPG)试剂盒规格
：96T/48T

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行
。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁
。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的
，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用
，非食用