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细胞简介：

兔气管成纤维分离自气管组织
；气管（Trachea），呼吸器官的一部分
；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处
，分左、右主支气管
，分叉处称为气管杈
。气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性
，软骨为“C"字形的软骨环，缺口向后
，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态
。管腔衬以粘膜
，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚

，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的支气管成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。气管成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括
：构造和维持组织的正常形态
，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织
。

方法简介：

实验室分离的兔气管成纤维采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔气管成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态

：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%；CO2
，5%

兔气管成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠Kruppel样因子4(KLF4)检测试剂盒

，英文名： KLF4 ELISA Kit

Human vimein (VIM) ELISA Kit 人波形蛋白(VIM)检测试剂盒

HorseImmunoglobulinE,IgEELISAKit 马免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCAM-ab(Humanai-calmodulinspecificaibody)ELISAKit人抗钙调素特异抗体

细菌β-半乳糖苷酶活性原位染色试剂盒40次

Ratacetylcholine,ACHELISAKit大鼠乙酰(Ach)检测试剂盒规格
：96T/48T

IFNA13重组食蟹猴 IFNA13 / Interferon alpha-13 蛋白 (Fc 标签) Protein

Measles virus of fusion protein 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白 0.5mgMeasles virus of fusion protein 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)

EDA2R重组人 XEDAR / EDA2R 蛋白 Protein

IL22 Protein Human 重组人 IL22 / IL-22 / Interleukin 22 蛋白

TLR2 Protein Mouse 重组小鼠 TLR2 蛋白

Measles virus of fusion protein 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白 0.5mgMeasles virus of fusion protein 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)

IL22 Protein Human 重组人 IL22 / IL-22 / Interleukin 22 蛋白

IFNA13重组食蟹猴 IFNA13 / Interferon alpha-13 蛋白 (Fc 标签) Protein

TLR2 Protein Mouse 重组小鼠 TLR2 蛋白

EDA2R重组人 XEDAR / EDA2R 蛋白 Protein

豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 大鼠血管活性肠肽(VIP)检测试剂盒

HumanAnnexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREB检测试剂盒人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)检测试剂盒规格


：96T/48T

组织FGFR1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit人前心肽(Pro-ANP)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔气管成纤维细胞人总胆汁检测试剂盒   人总胆汁试剂盒   规格型号：96T/48T   人总胆汁试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：人总胆汁试剂盒
、人总胆汁检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

人总检测试剂盒   人总试剂盒   规格型号：96T/48T   人总试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：人总试剂盒、人总检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人转移因子检测试剂盒   人转移因子试剂盒   规格型号：96T/48T   人转移因子试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：人转移因子试剂盒、人转移因子检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人转铁蛋白受体检测试剂盒   人转铁蛋白受体试剂盒   规格型号：96T/48T   人转铁蛋白受体试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人转铁蛋白受体试剂盒、人转铁蛋白受体检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态


、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。