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① 组织块培养法

组织块培养是常用
、简便易行和成功率较高的原代培养方法
。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层
，以利于组织块粘着于瓶壁
，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞
、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离
，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养

。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后
，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响
，以及局部环境的生物调节作用
。

产品名称：兔肝外胆管上皮细胞

英文名称
：Rabbit Extrahepatic Bile Duct Epithelial Cells

组织来源：胆管

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔肝外胆管上皮分离自肝外胆管组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用

；肝脏也制造消化系统中之胆汁
。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方
。肝脏是机体消化系统中大的消化腺
，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官
。肝脏在机体位置和形态结构
：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接
。临床上常见的胆管病变如胆道闭锁、先天性胆总管囊肿
、原发性硬化性胆管炎等
，都是以胆管上皮细胞为病变的靶位
，引起胆管上皮的损伤。了解正常胆管上皮细胞的生物学特征和病变胆管上皮细胞的病理生理学特征对研究胆管病变的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。

实验室分离的兔肝外胆管上皮采用胶原酶灌注消化法后

，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的兔肝外胆管上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基
：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔肝外胆管上皮体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型
、分化程度
、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密
，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖
，必须将现有的组织块充分散开
，使细胞解离出来
。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液
、羊水
、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟
。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散
，形成细胞悬液

，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)
，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动
，使团块膨松，由块状变成絮状
，此时再采用机械法
，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡
，使细胞团块得以较充分的分散
，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后
，细胞容易贴壁生长
。

小鼠γ基(GABA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠5羟色胺(5-HT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠P物质受体(SP-R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠P物质(SP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠呼肠孤病毒3型抗体(RV-3 Ab)试剂盒 96T/48T

Rat phosphotylinosital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)试剂盒

humanAzidothymidine,AZTELISAKit 人(AZT)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-myelinassociatedglycoproteinaibody,MAGAb试剂盒人抗髓鞘相关糖蛋白抗体(MAGAb)试剂盒规格
：96T/48T

植物染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次

HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit人解脲脲原体抗体(UU-Ab)试剂盒规格
：96T/48T

HA重组甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

Sema3F (semaphorin 3F 0.5mgSema3F (semaphorin 3F) 臂板蛋白3F抗原

METAP1D重组人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 蛋白 Protein

EVI2A Protein Human 重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签)

IL2RA Protein Human 重组人 IL2Ra / CD25 蛋白 (Fc 标签)

Sema3F (semaphorin 3F 0.5mgSema3F (semaphorin 3F) 臂板蛋白3F抗原

EVI2A Protein Human 重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签)

HA重组甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL2RA Protein Human 重组人 IL2Ra / CD25 蛋白 (Fc 标签)

METAP1D重组人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 蛋白 Protein

兔肝外胆管上皮细胞大鼠膜联蛋白A2(ANXA2)试剂盒 ，英文名： ANXA2 ELISA Kit

Mouse insulin ELISA Kit (INS) 小鼠胰岛素(INS)试剂盒

RatangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGFAP(Mouseglialfibrillaryacidicprotein)ELISAKit小鼠神经胶质纤维酸性蛋白

细胞甘油二脂酰激酶(DAGKINASE)酶连续循环比色法定量试剂盒20次

RatsolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)试剂盒规格：96T/48T

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月
。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的
，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗
，非药用，非食用