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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介

：

兔肠微血管内皮分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管

。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段
。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的
，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便

，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物
，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统
。微血管是极细微的血管，管径平均为6-9μm，连于动、静脉之间，互相连接成网状。微血管壁薄，管径较小，血流很慢
，通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换
。其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织

。另外还常可见到一种扁而有突起的细胞贴在微血管的管壁外面，称为周细胞。

方法简介：

实验室分离的兔肠微血管内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔肠微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体

、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

兔肠微血管内皮体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人孕酮受体(PGR)ELISA 试剂盒

Human tumor vascular endothelial growth factor (TAF) ELISA Kit 人肿瘤血管生长因子(TAF)检测试剂盒

HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humaninsulin-likegrowthfactors2,IGF-2检测试剂盒人胰岛素样生长因子2(IGF-2)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织己糖激酶(HEXOKINASE)酶偶联反应比色法定量检测试剂盒20次

HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)检测试剂盒规格：96T/48T

ICOS重组小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 标签) Protein

α2-巨球蛋白(α2M)重组蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

HNRNPR重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签) Protein

IL9 Protein Human 重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

CDH18 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白

甘露糖受体C1样蛋白1(MRC1)重组蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1(MRC1)

IL9 Protein Human 重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

AKT3重组小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 标签) Protein

FCGR2B Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白

CDH1重组人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 (Fc 标签) Protein

豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(cytovillin/ezrin)检测试剂盒

HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗体检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4检测试剂盒人周期素依赖性激酶4(CDK-4)检测试剂盒规格：96T/48T

组织GRK5激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多发性肌硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)检测试剂盒规格：96T/48T

兔肠微血管内皮细胞人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人过氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人17-类固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T