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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

兔表皮角化分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层
，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构
，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层
、棘层、颗粒层、透明层和角质层
。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层
。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加
，并丧失分裂活性
。

方法简介
：

实验室分离的兔表皮角化上皮先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔表皮角化上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基
：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-3代左右
；2代以内状态佳

消化液
：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%
；CO2，5%

兔表皮角化上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

兔子层连蛋白/板层素(LN)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)检测试剂盒

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：96T/48T

组织RSK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanOsteogenicGrowthPeptide
，OGPELISAKit人成骨生长肽(OGP)检测试剂盒规格
：96T/48T

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HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

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IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

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豚鼠干扰素α(IFNα)检测试剂盒
，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人钙离子通道抗体(VGCC)检测试剂盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封闭抗体

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Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)检测试剂盒规格

：96T/48T

兔表皮角化上皮细胞人转铁蛋白（F）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转录因子抗体-1(ATF-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转甲状腺素蛋白(T)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装