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实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人膀胱成纤维分离自膀胱组织
；膀胱是一个储尿器官
，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌
，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层
、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌
，逼尿肌收缩
，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌
，形成尿道内括约肌
。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用

。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁

，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。

方法简介：

公司实验室分离的人膀胱成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人膀胱成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态


，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

小鼠骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

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HumanHemoglobinH,HbHELISAKit 人血红蛋白H(HbH)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42试剂盒96T人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)试剂盒规格：96T/48T

植物多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量试剂盒20次

MonkeyCollageypeⅣ,ColⅣELISAKit猴Ⅳ型胶原(ColⅣ)试剂盒规格：96T/48T

CAMK4重组小鼠 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 Protein

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CD274 Protein Canine 重组狗 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 标签)

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PLAC9重组人 PLAC9 / Placenta-specific 9 蛋白 (Fc 标签) Protein

人膀胱成纤维细胞大鼠细胞色素P450家族成员1A2(CYP1A2)试剂盒 
，英文名： CYP1A2 ELISA Kit

Mouse nerve nuition factor 4 (-4) ELISA Kit 小鼠神经营养因子4(-4)试剂盒

Mousebrain-gpeptides,BGP/GehrelinElisakit 小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-70(MouseHeatShockProtein70)ELISAKit小鼠热休克蛋白70

细胞KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR扩增试剂盒20次

ELISAKitIL-23大鼠白介素23