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实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人颅盖造骨分离自颅骨组织；造骨细胞（osteoblast）亦称成骨细胞。是参与骨组织形成的细胞。颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分
。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑
，共8块。面颅为颅的前下部分，包含眶

、鼻腔
、口腔等结构
，构成面部的支架
，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质
，形成骨吸收陷窝；其后
，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质
，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键
。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制

、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段
。

方法简介
：

公司实验室分离的人颅盖造骨采用胶原酶消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人颅盖造骨经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠钙调素(CAM)检测试剂盒 ，英文名
： CAM ELISA Kit

Lester pig mononucleosis septozotocin (listeriolysin) ELISA Kit 猪单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)检测试剂盒

转基因植物NPTⅡ基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMCP-2/CCL8(Humanmonocytechemotacticprotein2)ELISAkit人单核细胞趋化蛋白2

体液腺苷酸环化酶(AdenylateCyclase)活性荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitIFN-α猫α干扰素

IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白

HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白

IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

豚鼠免疫球蛋白G2(IgG2)检测试剂盒
，英文名： IgG2 ELISA Kit

Human granulysin (histatin 5) ELISA Kit 人富组蛋白(histatin 5)检测试剂盒

rabbitImmunoglobulinG,IgGELISAKit 兔子免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBAFF-R(HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor)ELISAKit人B细胞活化因子受体

线虫补骨脂素(4-imethylpsoralen)诱导突变试剂盒10次

Rabbitcatecholamine,CAELISAKit兔儿茶酚胺(CA)检测试剂盒规格：96T/48T

人颅盖造骨细胞含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样

脱氢酶测试盒   紫外分光光度法   50管/48样

还原糖含量测试盒   可见分光光度法   50管/24样

纤维素酶（CL）测试盒   可见分光光度法   50管/24样