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细胞简介：

人肠静脉内皮分离自肠静脉
；肠道指的是从胃幽门至门的消化管
。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的
，大肠主要浓缩食物残渣
，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物
，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统

。

方法简介
：

公司实验室分离的人肠静脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肠静脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清


，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA 试剂盒

People leils binding type AFP / AFP Varia 3 (AFP-L3) ELISA kit E 人小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)检测试剂盒E

Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit 重链(IgH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanE1/ubiquitin-activatingenzyme,E1/UBAE检测试剂盒人泛素激活酶(E1/UBAE)检测试剂盒规格：96T/48T

组织PAK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

humanperoxisomeproliferativeactivatedreceptorgamacoactivator1alpha,PPARGC1ELISAKit人过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)检测试剂盒规格
：96T/48T

FGF1重组人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

结合球蛋白(CBG)重组蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

SMR3B重组人 SMR3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

CDK1 Protein Human 重组人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

结合球蛋白(CBG)重组蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

CDK1 Protein Human 重组人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 标签)

FGF1重组人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SMR3B重组人 SMR3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human Phosphoglucomase (PGM) ELISA Kit 人0酸葡萄糖变位酶(PGM)检测试剂盒

HumanAngiotensinaseELISAKit 人血管紧张肽酶(Angiotensinase)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerferonγ,IFN-γ检测试剂盒鸡γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞ERBETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit小鼠糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒规格：96T/48T

人肠静脉内皮细胞小鼠纤维连结蛋白(mous FN)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠X(mouse FX)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠(mouse Fibrinogen)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。