242net必赢

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介

：

人表皮角质形成分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成
，具有抗摩擦和抗损伤的作用
。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成
。从基底层到表面可分为五层
，即基底层、棘层
、颗粒层、透明层和角质层
。表皮角质形成细胞是一种能合成角质蛋白的上皮细胞
，此类细胞为表皮的主体

，由表皮深层始逐渐增殖
、分化
，并在成为角化的角质细胞中
，细胞核与细胞器消失，细胞亦失去生理功能而脱落。未脱落部分对机体尚有保护作用
，故不必在洗擦身体时用力搓擦


，使其过早脱失。表皮角质形成细胞主要分布于表皮基底层，在上皮程序性死亡后
，细胞产生角化并移向表皮。体外培养的表皮角化细胞容易导致终末分化
，不能充分增殖。角质形成细胞终产生角质蛋白，在其向角质细胞演变过程中，一般可以分为四层
，即基底层
、棘层
、颗粒层以及角质层
。有人把前三层或前二层称为生发层或马尔匹基层。此外，在某些部位，特别在掌跖部位，角质层下方还可见到透明层。

方法简介：

公司实验室分离的人表皮角质形成层先消化
、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人表皮角质形成经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 试剂盒

People of coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 人皮质酮/肾上腺酮(CO)检测试剂盒

HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 人酰化刺激蛋白(ASP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PG检测试剂盒人8异前列腺素(8-iso-PG)检测试剂盒规格
：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)肾组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IgEreceptoraibodyELISAKit小鼠抗IgE受体抗体检测试剂盒规格：96T/48T

IL22RA1重组狗 IL22RA1 / IL22R 蛋白 Protein

NGN3(neurogenin 3; Neurog3 0.5mgNGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神经元素3抗原

ADRBK1重组人 GRK2 / ADRBK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CDH2 Protein Human 重组人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 蛋白 (His & Fc 标签)

FABP4 Protein Mouse 重组小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP / AFABP 蛋白

NGN3(neurogenin 3; Neurog3 0.5mgNGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神经元素3抗原

CDH2 Protein Human 重组人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 蛋白 (His & Fc 标签)

IL22RA1重组狗 IL22RA1 / IL22R 蛋白 Protein

FABP4 Protein Mouse 重组小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP / AFABP 蛋白

ADRBK1重组人 GRK2 / ADRBK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human phosphorylated exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 人0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)检测试剂盒

HumanPancreaticLipase,PLELISAKit 人胰脂肪酶(PL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerferonα,IFN-α检测试剂盒鸡α干扰素(IFN-α)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞DHPR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测试剂盒规格

：96T/48T

人表皮角质形成细胞小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠腺病毒（ADV）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠纤维蛋白肽B（FPB）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装