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① 组织块培养法

组织块培养是常用
、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层
，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长
。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞
、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离
，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养
。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系
、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用

。

产品名称
：大鼠椎间盘纤维环细胞

英文名称
：Rat Intervertebral Disc Fibroblast Cells

组织来源：椎间盘组织

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

大鼠椎间盘纤维环分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间
，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面
。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来
。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠

，使纤维环成为坚实的组织
，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄
。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞
，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形
，有的可看到双层单位膜
，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给
。一但这种供给减少
，纤维环的生物性能就会减弱
，椎间盘开始退变。

公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环采用胶原酶-联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养基 含FBS
、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%；CO2
，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度

、年龄等

⑥ 作好记录

2
、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖
，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液
、羊水、胸水或腹水的悬液材料
，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密
，为了使组织中的细胞充分分散
，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法
。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松
，由块状变成絮状
，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散
，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后
，细胞容易贴壁生长。

小鼠碱性0酸酶   英文名称：   Mouse Alkaline phosphatase   规格

：      英文缩写
：   ALP

小鼠同种异体移植性因子1   英文名称：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   规格

：      英文缩写
：   AIF-1

小鼠血管生成素样蛋白2   英文名称：   Mouse Angiopoietin like protein 2   规格：      英文缩写
：   ANGPTL2

小鼠血管生成素样蛋白4   英文名称
：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   规格
：      英文缩写：   ANGPTL4

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human prostacycline (PGI) ELISA Kit 人前列环素(PGI)试剂盒

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit 人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAdenovirusIgG,ADV-IgG试剂盒人腺病毒IgG(ADV-IgG)试剂盒规格：96T/48T

植酸待测样品处理试剂盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISAKit小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)试剂盒规格
：96T/48T

PREP重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

钙非依赖性0脂酶A2(iPLA2)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

MAP1LC3B重组人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

CXCL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

T-细胞免疫调节因子1(TCIRG1)重组蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

AARS重组小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

CXCL11重组人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein

大鼠椎间盘纤维环细胞大鼠载脂蛋白E(APOE)试剂盒 ，英文名： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)试剂盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趋化因子

细胞/组织多聚赖载玻片制备试剂盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗
，非药用，非食用