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细胞简介
：

大鼠外周血DC分离自外周血，由外周血单核细胞诱导而成的
；外周血是除骨髓之外的血液
，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，242net必赢把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长
，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落
，细胞大而形态不规则，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突
，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样
。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成
，多数呈悬浮生长， 细胞呈圆形
，细胞体积进一步增大
，表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 )，伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志
，主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子


，进而激活T淋巴细胞，诱导免疫应答
，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节

；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力
，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答，不能激活T细胞的信号
，可导致T细胞无能
，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面CD80、CD86
、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下
。

方法简介
：

实验室分离的大鼠外周血成熟DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠外周血树突状(成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定
、细 胞 形态等综合鉴定
，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性

：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形，树突状

传代特性
：属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%；CO2，5%

大鼠外周血树突状(成熟DC细胞)体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠还原酶(GR)检测试剂盒 ，英文名
： GR ELISA Kit

Porcine Bcl-2 associated X protein (BAX) ELISA Kit 猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)检测试剂盒

多瘤病毒(BK) 核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIP-3Beta/ELC/CCL19(HumanMacrophageInflammatoryProtein-3Beta)ELISAkit人巨噬细胞性蛋白3β

体液结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitIL-4犬白介素4

IL6重组人 IL6 / Interleukin-6 蛋白 Protein

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)重组蛋白 Recombinant Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)

PDCD1LG2重组人 B7-DC / PD-L2 / CD273 / PDCD1LG2 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD4 Protein Human 重组人 CD4 / LEU3 蛋白 (His & Fc 标签)

HA Protein H4N6 重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)重组蛋白 Recombinant Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)

CD4 Protein Human 重组人 CD4 / LEU3 蛋白 (His & Fc 标签)

IL6重组人 IL6 / Interleukin-6 蛋白 Protein

HA Protein H4N6 重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

PDCD1LG2重组人 B7-DC / PD-L2 / CD273 / PDCD1LG2 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)检测试剂盒

Humangalactose-6-sulphatesulphatase,Gal-6SELISAKit 人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

包虫抗体IgG(间接法二步法)

油菜培养基500毫升溶液/片剂

Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠巨噬细胞性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠(LZM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。