242net必赢

细胞简介
：

大鼠胚胎成纤维分离自胚胎
；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大
，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子
，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境
，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用
。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠胚胎成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胚胎成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1
、HBV

、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

中文名称   方法   规格

大鼠粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISAKit   ELISA. 

大鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISAKit   ELISA. 

大鼠雌激素受体(ER)ELISAKit   ELISA.

猪白介素1α(IL-1α)ELISA 试剂盒

Human ai Q thermal aibody (ai-Q-Ab) ELISA Kit 人抗Q热抗体(ai-Q-Ab)试剂盒

PorcineIerleukin1,IL-1ELISAKit 猪白介素1(IL-1)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAKA(HumanAi-keratinaibody)ELISAKit人抗角蛋白抗体

血液尿酸含量酶偶联比色法定量试剂盒20次

MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit小鼠高敏三甲状腺原(u-T3)试剂盒

CD24重组小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白  Protein

凋亡相关因子配体(FASL)重组蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)

NAPG重组人 NAPG / Gamma SNAP 蛋白 (His 标签) Protein

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 标签)

IGFBP3 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 标签)

凋亡相关因子配体(FASL)重组蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 标签)

CD24重组小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白  Protein

IGFBP3 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 标签)

NAPG重组人 NAPG / Gamma SNAP 蛋白 (His 标签) Protein

大鼠胚胎成纤维细胞兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA 试剂盒

Rat angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 大鼠血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)试剂盒

Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)试剂盒 进口分装

HumanD-Dimer,D2D试剂盒人D二聚体(D2D)试剂盒

组织IRAK1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。