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实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

大鼠胚成纤维分离自胚胎
；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形

、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞
，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子
，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子
，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用
。

方法简介：

实验室分离的大鼠胚成纤维采用消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的大鼠胚成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS
、bFGF、Insulin
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2
，5%

大鼠胚成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒 ，英文名： GAD-Ab ELISA Kit

Porcine ierferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 猪γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitformIgD(HumanmembraneIgD)ELISAKit人表面膜免疫球蛋白D

体液赖(lysine)含量荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitPROG牛孕激素/孕同

CSF1重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

胱天蛋白酶5(CASP5)重组蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

CD180 Protein Human 重组人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

CD2 Protein Canine 重组狗 CD2 蛋白 (Fc 标签)

胱天蛋白酶5(CASP5)重组蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD180 Protein Human 重组人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

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CD2 Protein Canine 重组狗 CD2 蛋白 (Fc 标签)

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 3 (MCP-3/CCL7) ELISA Kit 大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)检测试剂盒

Humanansferfactor,TFELISAKit 人转移因子(TF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor25(OH)D3/25HVD3(Human25-DihydroxyvitaminD3)ELISAKit人25羟基3

饮料果胶化学比色法定量检测试剂盒20次

MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit小鼠L苯解氨酶(PAL)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠胚成纤维细胞心肌肌钙蛋白1   英文名称：   cardiac oponin 1   规格：      英文缩写：   CTn1

Ⅰ型胶原C端肽   英文名称
：   C-telopeptide of type Ⅰ collagen   规格：      英文缩写
：   CTX-Ⅰ

   英文名称：   Cytochrome C   规格
：      英文缩写：   Cytochrome C

CXC趋化因子受体1   英文名称
：   CXC chemokine receptor 1   规格
：      英文缩写：   CXCR1