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ACTH DRGelisa试剂盒说明书服务承诺：
一、质量保证,有问题免费包换；
二
、提供免费代测服务（为客户提供来样检测服务,zui大限度实验结果的有效性）；
三、提供全程技术指导。

大鼠促肾上腺皮质激素（ACTH）DRGelisa试剂盒 Rat Adrenocorticotropic Hormon,ACTH ELISA Kit
ACTH DRGelisa试剂盒说明书【实验用途】促肾上腺皮质激素 (Adrenocorticotropic Hormon),是脊椎动物脑垂体分泌的一种多肽类激素
。它能促进肾上腺皮质的组织增生以及皮质激素的生成和分泌
。ACTH的生成和分泌受下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）的直接调控。分泌过盛的皮质激素反过来也能影响垂体和下丘脑
，减弱它们的活动
。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体
，经（biotin）标记
。样品和标记抗体先后加入酶标板孔反应后
，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色
。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色
，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关
。
试剂盒组成及试剂配制 ：
1.ACTH DRGelisa试剂盒说明书 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）
：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）
：1×10ml/瓶。
6. 标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1
：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）
：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）
：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍
。 
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
​
操作流程：
（1）ACTH DRGelisa试剂盒说明书待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔
；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl
；另设一个空白对照孔
，加入纯细胞裂解液100μl
。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜
。
（3）洗板

：吸干孔内反应液

，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后
，即甩去）
，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl
，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板
，同（4）
。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）

。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl
，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2）
，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰
。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后
，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准
。
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