242net必赢

细胞简介：

增生性瘢痕由少量有组织的胶原纤维组成，缺乏粘液样基质。增生性瘢痕是深层真皮损伤的结果，尤其是创伤后形成的伤口和炎症、纤维化阶段延长的伤口。瘢痕大小于损伤范围，而不累计周围未受伤皮肤，能自行退化。

细胞特性：

1） 细胞来源于手术切除的增生性瘢痕组织
。

2) 细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1

、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和。

5) 细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

242net必赢推荐使用 Delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 试剂盒

Rat angiotensin I (Ang- I) ELISA Kit 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测试剂盒

Humanai-doublesandedDNA,dsDNAELISAKIT 人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)检测试剂盒 进口分装

HumanCyclin-dependekinase1,CDK-1检测试剂盒人周期素依赖性激酶1(CDK-1)检测试剂盒

组织GRK4α激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPrednisolone,PSELISAKit人龙(PS)检测试剂盒

THPO重组小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签) Protein

ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2 0.5mgChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈碱型乙酰受体M2(抗原)

ELK1重组人 ELK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

AK2 Protein Human 重组人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 标签)

FGFR4 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 标签)

ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2 0.5mgChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈碱型乙酰受体M2(抗原)

AK2 Protein Human 重组人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 标签)

THPO重组小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签) Protein

FGFR4 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 标签)

ELK1重组人 ELK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

猪白介素17(IL-17)ELISA 试剂盒

Human ai Sc1-70 aibody (Sc1-70-Ab) ELISA Kit 人抗Sc1-70抗体(Sc1-70-Ab)检测试剂盒

Porcineleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 猪白血病抑制因子受体(LIFR)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAIF(Mouseapoptosisinducingfactor)ELISAKit小鼠凋亡诱导因子

血液/活化II(THROMBIN/FACTORIIa)活性比色法定量检测试剂盒20次

Mouseulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)检测试剂盒

人增生性瘢痕成纤维细胞中文名称   方法   规格

大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISAKit   ELISA. 

大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISAKit   ELISA. 

大鼠补体片断5a(C5a)ELISAKit   ELISA.