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实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

星形胶质细胞，是胶质细胞中体积大的一种
。从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间
，起支持和分隔神经细胞的作用
。

纤维性星形胶质细胞多分布在脑脊髓的皮质，突起细长，分支较少，胞质中含，多分布在灰质，细胞突起粗短，分支多。胞质内胶质丝较少，又称苔状细胞

。电镜下星形胶质细胞的胞核有缺失，胞质较清亮，游离核糖核蛋白体和粗面内质网均很少，糖原颗粒丰富，有大量的胶质丝
。

纤维形星形胶质细胞的突起呈长圆柱形，而原浆性星形胶质细胞的突起呈薄片状
，并常包裹着神经细胞及其突触。星形胶质细胞的脚板与血管内皮细胞之间相隔一层基板，脚板质膜与基板接触处有半桥粒结构。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脑组织。

2)细胞鉴定

：神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)荧光染色法
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：星状细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 DELF 原代 星形胶质 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

/酵母碱性焦磷酸酶（Alkaline Pyrophosphatase）活性比色法定量检测试剂盒

细胞CREB蛋白表达比色法定量检测试剂盒

残留ELISA测试盒（残留）

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小鼠二氢脱氢酶(DLD)elisa检测试剂盒

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硫酸乙酰肝素蛋白多糖2抗体 HSPG2/Heparan Sulfate Proteoglycan 2

ENAH蛋白抗体 ENAH

FAM195B蛋白抗体 FAM195B

锌指蛋白913抗体 zbtb11

素抗体 Thymulin

促黄体生成素受体抗体 LHR

蛋合成酶MTR抗体 MTR

丝/苏蛋白激酶ICK抗体 ICK

丝裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白2抗体 JIP2

PE标记大鼠CD8a单克隆抗体 Rat CD8a/PE

PE标记小鼠FOXP3单克隆抗体 Mouse FOXP3/PE

14-3-3 Theta重组兔单克隆抗体 14-3-3 Theta

1号染色体开放阅读框31抗体 C1orf31

环指蛋白207抗体 RNF207

鸡白痢、鸡伤寒菌抗体 Salmonella gallinarum

小鼠5羟色胺受体2A(5-HTR 2A)elisa检测试剂盒

异柠檬酸脱氢酶gamma亚基抗体

IDH3G

白血病相关蛋白AHI1抗体

兔星形胶质细胞AHI1

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。