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ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液
、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份
。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液）
，有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外
，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固
、收缩后即可取得。ELISA除特殊情况外

，在医学检验中均以血清作为检测标本
。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中
，ELISA溶血标本可能会增加非特异性显色。