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        ​蛋白磷酸酶抑制剂混合液III型荧光定量PCR实验步骤
        点击次数 :754 更新时间 :2022-03-01

        荧光定量PCR实验步骤 :

        ①取冻存已裂解的细胞 ,室温放置5分钟使其*溶解。

        ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang ,盖紧管盖 。手动剧烈振荡管体15秒后 ,15到30℃孵育2到3分钟 。4℃下12000rpm离心15分钟 。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

        ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

        ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制) ,清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。

        ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟 。

        ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次 ,使其*溶解 ,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

        转录因子E2F-1抗体

        内皮素转化酶1抗体

        细胞外基质蛋白1抗体

        外胚层发育不良抗体

        E2 tag标签抗体

        铁螯合酶抗体

        DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体

        磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体

        上皮细胞粘附分子抗体

        表皮生长因子抗体

        表皮生长因子受体3抗体

        上皮钙粘附分子抗体

        红细胞生成素受体抗体

        脑啡肽抗体

        EID2蛋白抗体

        上皮细胞粘附分子抗体

        红细胞膜相关蛋白ERMAP抗体

        腺样癌特异性相关抗原抗体EMC1抗体

        腺样癌特异性相关抗原抗体EMC1抗体

        染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1抗体


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