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        1-磷酸鞘氨醇检测试剂盒操作步骤
        点击次数 :866 更新时间 :2021-10-05

        操作步骤:


        1、准备:从冰箱取出试剂盒 ,室温复温平衡30分钟。


        2 、配液 :用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。


        3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板 ,固定于框架上,分别设置标准品孔 、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。


        4、温育 :37℃水浴锅或恒温箱温育30min。


        5 、洗板 :弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液 ,吸水纸上拍干 ,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。


        6 、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。


        7、温育 :37℃水浴锅或恒温箱温育30min。


        8 、洗板 :弃去液体 ,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min ,甩去洗涤液 ,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板) 。


        9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s) ,37℃避光显色15min。


        10、终止:取出酶标板 ,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。


        11 、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内 ,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值) 。


        12、计算 :根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值 ,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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