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        过氧化物酶elisa 试剂盒在进行实验时需要注意的地方有哪些?
        点击次数 :790 更新时间:2021-02-24
          使用过氧化物酶elisa 试剂盒进行试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应 。
          在ELISA中 ,进行各项实验条件的选择是很重要的 ,其中包括:
          固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯 、聚丙酰胺和纤维素等 。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等 。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体 ,在使用前均可进行筛选 :用等量抗原包被 ,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
          包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间 。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响 ,一般多采用4℃18~24小时。过氧化物酶elisa 试剂盒蛋白质包被的适浓度需进行滴定 :即用不同的蛋白质浓度(0.1 、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时 ,观察阳性标本的OD值 。选择OD值大而蛋白量少的浓度 。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml 。
          除此之外还要注意以下事项 :
          1.确定elisa 试剂盒在有效期内 ;
          2.仔细阅读说明书;
          3.按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积);
          4.标本制备要规范 ,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备,尽量分装做备份。短期内无法实验者 ,注意低温保存;
          5.根据检测标本数量确定所需试剂的量;
          6.准备好所有实验额外所需物品,如试管 、吸头、移液器、离心机等;
          7.过氧化物酶elisa 试剂盒按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。
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