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绵羊星状病毒2型RT-LAMP试剂盒反应五要素
点击次数：871 更新时间：2021-01-05
绵羊星状病毒2型RT-LAMP试剂盒反应五要素 ：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶 、dNTP、模板和Mg2+ 引物 ： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物 ，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜 ，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体 ，产生非特异的扩增条带 。
⑤引物3’端的碱基 ，特别是zui末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性 ：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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