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        上海肉芽肿鞘杆菌PCR检测试剂盒使用方法
        点击次数 :1051 更新时间:2020-11-03

        使用方法:
        测定法的灵敏度来自作为报告的酶。*,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象 。因此该体系常被称为酶放大体系。
        1. 标准品的稀释 :本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
         12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
         6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
         3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
         1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
        2. 加样:分别设空白孔 、标准孔 、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁 ,轻轻晃动混匀。|
        3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
        4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
        5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体 ,甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外 。
        7. 温育:操作同3 。
        8. 洗涤 :操作同5。
        9. 显色 :每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀 ,37℃避光显色15分钟.
        10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
        11. 测定 :以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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