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操作步骤
：

①．从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
。

②．设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL

；

③．样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

④．除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL
，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min
。

⑤．弃去液体
，吸水纸上拍干
，每孔加满洗涤液，静置1min
，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次   （也可用洗板机洗板）。

⑥．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min

。

⑦．每孔加入终止液50μL，15min内
，在450nm波长处测定各孔的OD值。

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