1. 血清 ：室温血液自然凝固10-20分钟 ，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清 ，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆 ：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂 ，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成 ，应该再次离心 。
3. 尿液 ：用无菌管收集 ，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清 ，保存过程中如有沉淀形成 ，应再次离心。胸腹水 、脑脊液参照实行 。
4. 细胞培养上清 ：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融 ，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清 。保存过程中如有沉淀形成 ，应再次离心 。
5. 组织标本：切割标本后 ，称取重量 。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用 。标本融化后仍然保持2-8℃的温度 。加入一定量的PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测 ，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取 ，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性 。
操作步骤：
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在* 、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔 、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔 ，再在第三 、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀 ；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五 、第六孔中，再在第五 、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五 、第六孔中各取50μl分别加到第七 、第八孔中 ，再在第七 、第八孔中分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第七 、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60 mIU/ml ，40 mIU/ml ，20 mIU/ml，10 mIU/ml ， 5mIU/ml）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂 ，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育 ：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用 。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液 ，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干 。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl ，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止 ：每孔加终止液50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定 ：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用 ，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出 ，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性 ，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内 ，如标本数量多，使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用 ，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行 ，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品 ，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
本试剂仅供研究使用 目的 ：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的活性。
实验原理 ：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)水平。用纯化的小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)，再与HRP标记的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色 。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色 。颜色的深浅和样品中的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的浓度。
上一篇 讲解实验注意事项及性能 下一篇 测定结果不一致常见原因分析